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色谱柱容易坏是因为用对保护柱
2017-12-16 00:52:49

  在高效液相分析检测样品的过程中,色谱柱会受到来自于样品及色谱系统的污染,从而导致色谱柱耐用性差、寿命缩短。

  来自于色谱系统的污染主要指,HPLC仪器系统中部件磨损而产生的固体颗粒,以及流动相系统过滤不完全残留的固体颗粒。来自于样品的污染主要指,未完全溶解的样品或者已完全溶解的样品进入色谱系统中,由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异,导致沉淀析出污染系统。

  特别是对于中药、天然产物、合成中间体及生物药品的检测,因基质的复杂性,色谱柱受污染的情况会更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等,从而带来检测成本高,测试结果不准确等各种影响。

  保护柱是液相色谱分析中重要的色谱耗材,使用保护柱可大大降低分析柱受污染的程度,延长分析柱使用寿命。

  保护柱位于进样器与分析柱之间, 作用主要两方面:

  1. 截留不溶性颗粒

  2. 吸附样品基质中的杂质

  一、如何选择保护柱?

色谱柱容易坏是因为用对保护柱

  1. 保护柱的填料,与分析柱保持一致!填料品牌一致,才能100%确保选择性一致。

  2.保护柱的规格,要与分析柱匹配!填料粒径一致,保护柱的内径与分析柱的内径相近。

  3.对于精细分离,保护柱本身的装填柱效要足够好!

  4.对于精细分离或者小内径色谱柱分离,保护柱的连接死体积要尽可能小。

  5.如果是用于UHPLC柱,还要考虑保护柱的耐压能力。

  保护柱不理想,就会导致峰扩散,分离度下降,不利于精细分离。

色谱柱容易坏是因为用对保护柱

  理想的保护柱,即使分析柱短小如4.6×100mm,安装保护柱后也未引起分离度与峰高的降低。

色谱柱容易坏是因为用对保护柱

  二、如何使用保护柱?

  1.专柱专用。避免保护柱成为不同项目的交叉污染源。

  2.及时更换保护柱。当峰的理论塔板数下降15%,或是柱压上升15%,或是关键分离度下降15%时,都应该及时更换保护柱。

  3.不慎发生强污染时,可以将分析柱卸下,单独冲洗保护柱,可以使污染物更快的从保护柱中流出。——但是不可以超声保护柱。

  三、保护柱使用注意事项

  1.独立式保护柱与分析柱连接时,连接管路尽可能短,且接口切面平滑,尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。

  2.卡套式保护柱一般未标注液流方向,使用时最好自行标注,并按照标注方向来使用,以免正反向使用后,截留的杂质污染分析柱。

  3. 直接填装的短柱型保护柱,出现柱压升高或峰型变差时,可不接分析柱进行反向清洗,清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。

  4. 卡套式保护柱,柱芯替换时,注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配,同时不易旋拧过紧,以防滑丝。

  5. 保护柱或柱芯一般不建议超声清洗,因可能对填料表面修饰有影响。

  6. 如同一保护柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后,再接分析柱使用。